更新時間▩•₪:2019-11-22
大腸桿菌類感受態細胞DB3.1規格10×100ul公司在感受態細胞的研發方面│₪•·,實力雄厚│₪•·,擁有了克隆·₪▩₪│、表達·₪▩₪│、酵母和農桿菌4大類│₪•·,共計百餘種感受態細胞╃☁·。在電擊感受態方面│₪•·,擁有了大腸桿菌 電轉化感受態細胞和農桿菌電擊感受態種類│₪•·,極大提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率╃☁·。
貨號▩•₪: | CY-899 |
供應商▩•₪: | 上海琛藝 |
數量▩•₪: | 1000只 |
英文名▩•₪: | DB3.1Chemically Competent Cell |
保質期▩•₪: | 1年 |
儲存條件▩•₪: | 零下80度 |
規格▩•₪: | 20*100ul |
DB3.1感受態細胞簡要說明▩•₪:
CMbio JM109菌株來源於E.coli K strain│₪•·,是提取高質量DNA的理想菌株│₪•·,recA1 和 endA1 的突變有利於克隆DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取╃☁·。攜帶 hsdR17基因型背景│₪•·,使得異源DNA不被內源核酸酶系統降解╃☁·。laqI qZΔM15的存在使JM109可用於構建克隆│₪•·,藍白斑篩選實驗;JM109感受態細胞經特殊工藝製作│₪•·,經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×109cfu/μg╃☁·。
JM109感受態細胞操作說明▩•₪:
2. 42℃水浴熱激45秒│₪•·,迅速放回冰上並靜置2分鐘│₪•·,晃動會降低轉化效率╃☁·。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌│₪•·,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊並塗布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上╃☁·。
5. 將平板倒置放於37℃培養箱過夜培養╃☁·。
JM109感受態細胞注意事項:
大腸桿菌類感受態細胞DB3.1規格10×100ul
操作步驟 (以下操作均按無菌條件的標準進行)
1. 取感受態細胞置於冰浴中│₪•·,如需分裝可將剛融化細胞 懸液分裝到無菌預冷的離心管中│₪•·,置於冰浴中╃☁·。 注意▩•₪: 一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl│₪•·, 可以根據實際情況分裝使用╃☁·。應注意所用DNA體積不 要超過感受態細胞懸液體積的十分之一╃☁·。以下實驗以 100 μl感受態細胞為例╃☁·。
2. 向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100 μl的感受態 細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)│₪•·,輕彈混勻│₪•·, 在冰浴中靜置30 min╃☁·。
3. 將離心管置於42℃水浴中放置60-90 sec│₪•·,然後快速將 管轉移到冰浴中│₪•·,使細胞冷卻2-3 min│₪•·,該過程不要搖 動離心管╃☁·。 注意▩•₪:此步驟也可將離心管置於室溫進行│₪•·,時間不需 十分準確│₪•·,夏季或室溫較高時│₪•·,可放置5-8 min左右│₪•·, 如果室溫較低│₪•·,可延長時間至8-15 min左右╃☁·。條件允 許建議使用42℃熱激方法╃☁·。
4. 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC或LB培養基 (不含抗生素)│₪•·, 混勻後置於37℃搖床振盪培養45 min (150 rpm)│₪•·,目的是使質粒上相關的抗性標記基因 表達│₪•·,使菌體復甦╃☁·。 5. 將離心管內容物混勻│₪•·,吸取100 μl已轉化的感受 態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂 培養基上│₪•·,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻 塗開╃☁·。將平板置於室溫直至液體被吸收│₪•·,倒置平 板│₪•·,37℃培養12-16 h╃☁·。 注意▩•₪:塗布用量可根據具體實驗來調整╃☁·。如轉化 的DNA總量較多│₪•·,可取更少量轉化產物塗布平 板;反之│₪•·,如轉化的DNA總量較少│₪•·,可取200- 300 μl轉化產物塗布平板╃☁·。如果預計的克隆較 少│₪•·,可透過離心(4000 rpm, 2 min)後吸除部 分培養液│₪•·,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中╃☁·。 (塗布剩餘的菌液可置於4℃儲存│₪•·,如果次日的轉 化菌落數過少可以將剩下的菌液再塗布新的培養 板)
不同感受態細胞基因型不一樣│₪•·,因此有不同的用途▩•₪:
1·₪▩₪│、DB3.1感受態細胞 是實驗室常用的感受態│₪•·,用於克隆的│₪•·,構建質粒│₪•·,建庫│₪•·,儲存質粒│₪•·,等等╃☁·。
2·₪▩₪│、DH10β可用於重組克隆的藍/白斑篩選│₪•·,允許構建更多具有代表性的基因組文庫│₪•·,可以增加質粒產量和數量
3·₪▩₪│、 Stbl3可以抑制重組│₪•·,適合轉化不穩定質粒│₪•·,可用於儲存慢病毒質粒╃☁·。
4·₪▩₪│、JM109適合重複基因表達,分子克隆·₪▩₪│、質粒提取和蛋白質表達│₪•·,可用於M13克隆序列測定和藍白斑篩選╃☁·。
5·₪▩₪│、 BL21(DE3)是常用來表達蛋白的│₪•·,如果用於儲存質粒│₪•·,質粒會很不穩定╃☁·。
快速轉化操作方法 (10min)
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱╃☁·。
2.DB3.1感受態細胞從-80℃拿出│₪•·,迅速插入冰中│₪•·,5分鐘後待菌塊融化│₪•·,加入目的DNA(質粒或連線產物)並用手EP管底輕輕混勻,│₪•·,冰中靜置5分鐘╃☁·。
3. 用200 μl槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上│₪•·,塗均勻│₪•·,表面無水漬╃☁·。
4. 將平板倒置放於37℃培養箱過夜培養╃☁·。如果進行藍白斑篩選操作│₪•·,將平板放37℃培養至少15h╃☁·。
快速熱激轉化操作方法 (25min,可提高轉化效率)
1.DB3.1感受態細胞從-80℃拿出│₪•·,迅速插入冰中│₪•·,5分鐘後待菌塊融化│₪•·,加入目的DNA (質粒或連線產物)並用手P管底輕輕混勻,│₪•·,冰中靜置5分鐘╃☁·。
2. 42℃水浴熱激45秒│₪•·,迅速放回冰上並靜置2分鐘 (晃動會降低轉化效率)╃☁·。加入700 μl 不含抗生素的LB│₪•·,37℃│₪•·,200 rpm 復甦10分鐘│₪•·,塗板 (均勻│₪•·,表面無水漬)╃☁·。
3. 將平板倒置放於37℃培養箱過夜培養╃☁·。如果進行藍白斑篩選操作│₪•·,將平板放37℃培養至少15h
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