更新時間☁☁:2019-11-21
大腸肝菌類感受態細胞XL1-Blue 10×100ul公司在感受態細胞的研發方面▩╃,實力雄厚▩╃,擁有了克隆│☁、表達│☁、酵母和農桿菌4大類▩╃,共計百餘種感受態細胞◕╃•☁。在電擊感受態方面▩╃,擁有了大腸桿菌 電轉化感受態細胞和農桿菌電擊感受態種類▩╃,極大提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率◕╃•☁。
貨號☁☁: | CY-6009K |
供應商☁☁: | 上海琛藝 |
數量☁☁: | 1000只 |
英文名☁☁: | JM109Chemically Competent Cell |
保質期☁☁: | 1年 |
儲存條件☁☁: | 零下80度 |
規格☁☁: | 20*100ul |
JM109 Chemically Competent Cell
產品規格:
JM109 | 10×100μl |
pUC19(control vector) | 10pg/μl 10μl |
JM109感受態細胞基因型☁☁:
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15]
JM109感受態細胞簡要說明☁☁:
CMbio JM109菌株來源於E.coli K strain▩╃,是提取高質量DNA的理想菌株▩╃,recA1 和 endA1 的突變有利於克隆DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取◕╃•☁。攜帶 hsdR17基因型背景▩╃,使得異源DNA不被內源核酸酶系統降解◕╃•☁。laqI qZΔM15的存在使JM109可用於構建克隆▩╃,藍白斑篩選實驗;JM109感受態細胞經特殊工藝製作▩╃,經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×109cfu/μg◕╃•☁。
JM109感受態細胞操作說明☁☁:
2. 42℃水浴熱激45秒▩╃,迅速放回冰上並靜置2分鐘▩╃,晃動會降低轉化效率◕╃•☁。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌▩╃,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊並塗布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上◕╃•☁。
5. 將平板倒置放於37℃培養箱過夜培養◕╃•☁。
JM109感受態細胞注意事項:
大腸肝菌類感受態細胞XL1-Blue 10×100ul
操作步驟 (以下操作均按無菌條件的標準進行)
1. 取感受態細胞置於冰浴中▩╃,如需分裝可將剛融化細胞 懸液分裝到無菌預冷的離心管中▩╃,置於冰浴中◕╃•☁。 注意☁☁: 一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl▩╃, 可以根據實際情況分裝使用◕╃•☁。應注意所用DNA體積不 要超過感受態細胞懸液體積的十分之一◕╃•☁。以下實驗以 100 μl感受態細胞為例◕╃•☁。
2. 向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100 μl的感受態 細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)▩╃,輕彈混勻▩╃, 在冰浴中靜置30 min◕╃•☁。
3. 將離心管置於42℃水浴中放置60-90 sec▩╃,然後快速將 管轉移到冰浴中▩╃,使細胞冷卻2-3 min▩╃,該過程不要搖 動離心管◕╃•☁。 注意☁☁:此步驟也可將離心管置於室溫進行▩╃,時間不需 十分準確▩╃,夏季或室溫較高時▩╃,可放置5-8 min左右▩╃, 如果室溫較低▩╃,可延長時間至8-15 min左右◕╃•☁。條件允 許建議使用42℃熱激方法◕╃•☁。
4. 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC或LB培養基 (不含抗生素)▩╃, 混勻後置於37℃搖床振盪培養45 min (150 rpm)▩╃,目的是使質粒上相關的抗性標記基因 表達▩╃,使菌體復甦◕╃•☁。 5. 將離心管內容物混勻▩╃,吸取100 μl已轉化的感受 態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂 培養基上▩╃,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻 塗開◕╃•☁。將平板置於室溫直至液體被吸收▩╃,倒置平 板▩╃,37℃培養12-16 h◕╃•☁。 注意☁☁:塗布用量可根據具體實驗來調整◕╃•☁。如轉化 的DNA總量較多▩╃,可取更少量轉化產物塗布平 板;反之▩╃,如轉化的DNA總量較少▩╃,可取200- 300 μl轉化產物塗布平板◕╃•☁。如果預計的克隆較 少▩╃,可透過離心(4000 rpm, 2 min)後吸除部 分培養液▩╃,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中◕╃•☁。 (塗布剩餘的菌液可置於4℃儲存▩╃,如果次日的轉 化菌落數過少可以將剩下的菌液再塗布新的培養 板)
注意事項☁☁:
021-39598508