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*0F感受態細胞規格

更新時間▩│:2019-12-04

簡要描述▩│:

*0F感受態細胞規格
本公司生產的E+ DH5α感受態細胞是採用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝製備得到•╃↟✘╃,具有無需繁瑣的冰浴₪│◕、熱擊程式•╃↟✘╃,簡單快速的進行質粒DNA的轉化☁·。使用pUC19 質粒檢測•╃↟✘╃,轉化效率zui高可達 2×107cfu/μg•╃↟✘╃,-80℃儲存 3-5 個月轉化效率不發生改變☁·。

*0F感受態細胞規格

 產品編號 產品名稱規格 價格 
 CY1100 DH5α感受態細胞 20×100 μl 300.00


操作方法▩│:(以下操作均按無菌條件的標準進行) 
1 ₪│◕、將感受態細胞置於冰上融化•╃↟✘╃,以下實驗以 100ul 感受態細胞為例☁·。 
2 ₪│◕、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA•╃↟✘╃,注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一•╃↟✘╃,輕輕旋轉離心管以混勻內容物•╃↟✘╃,冰浴放置30 分鐘☁·。 
3 ₪│◕、將離心管置於 42℃水浴中放置 60-90 秒•╃↟✘╃,然後快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘•╃↟✘╃,注意不要搖動離心管☁·。 
4 ₪│◕、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養基•╃↟✘╃,37℃ 180rpm 振盪培養1 小時☁·。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達•╃↟✘╃,使菌體復甦☁·。 
5 ₪│◕、取適量已轉化的感受態細胞塗布含相應抗生素的 SOC 或LB平板•╃↟✘╃,37℃倒置培養 12-16 小時☁·。塗布用量可根據具體實驗來調整•╃↟✘╃,如轉化的DNA總量較多•╃↟✘╃,可取100ul 左右的轉化產物塗板;反之•╃↟✘╃,如轉化的 DNA總量較少•╃↟✘╃,可取200-300ul 的轉化產物塗板☁·。過多菌液可以抑制細菌生長☁·。如果預計的*較少•╃↟✘╃,可透過離心後吸除部分培養液•╃↟✘╃,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中☁·。塗布剩餘的菌液可4 ℃儲存•╃↟✘╃,如果次日的轉化菌落數過少•╃↟✘╃,可以將剩下的菌液再塗布新的平板☁·。 

●  一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl•╃↟✘╃,可以根據實際情況分裝使用☁·。應注意所用DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一☁·。
以下實驗以100 μl感受態細胞為例☁·。

*0感受態細胞  向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態細胞能夠被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽和)•╃↟✘╃,輕輕旋轉離心管以混勻內容物•╃↟✘╃,在冰浴中靜置30 分鐘☁·。
3 將離心管置於42℃水浴中放置60-90 秒•╃↟✘╃,然後快速將管轉移到冰浴中•╃↟✘╃,使細胞冷卻2-3 分鐘•╃↟✘╃,該過程不要搖動離心管☁·。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養基(不含抗生素)•╃↟✘╃, 混勻後置於37℃搖床振盪培養1 小時(160-220 轉/分鐘)•╃↟✘╃,目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達•╃↟✘╃,使菌體復甦☁·。

*0F感受態細胞規格 將離心管內容物混勻•╃↟✘╃,吸取100 μl 已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上•╃↟✘╃,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻塗開☁·。將平板置於室溫直至液體被吸收•╃↟✘╃,倒置平板•╃↟✘╃,37℃培養12-16 小時☁·。
●  塗布用量可根據具體實驗來調整☁·。如轉化的DNA 總量較多•╃↟✘╃,可取更少量轉化產物塗布平板;反之•╃↟✘╃,如轉化的DNA 總量較少•╃↟✘╃,可取200-300 μl 轉化產物塗布平板☁·。如果預計的克隆較少•╃↟✘╃,可透過離心(4,000 rpm, 2分鐘)後吸除部分培養液•╃↟✘╃,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中☁·。(塗布剩餘的菌液可置於4℃儲存•╃↟✘╃,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再塗布新的培養板)

注意事項▩│:  
 1₪│◕、感受態細胞應儲存在-70 ℃•╃↟✘╃,不可反覆凍融•╃↟✘╃,否則其轉化效率將會降低☁·。  
 2₪│◕、實驗過程中應嚴格無菌操作•╃↟✘╃,防止其它 DNA的汙染•╃↟✘╃,避免為以後的篩選₪│◕、鑑定帶來影響☁·。  
 3₪│◕、轉化時•╃↟✘╃,轉化效率與外源 DNA的濃度在一定範圍內成正比•╃↟✘╃,但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率☁·。轉化時DNA體積要小於感受態細胞體積的十分之一☁·。  
 4₪│◕、轉化率的計算▩│:轉化率=產生菌落的總數/ 鋪板DNA總量☁·。  
 5₪│◕、為防止轉化實驗不成功•╃↟✘╃,可以保留部分連線產物•╃↟✘╃,以重新轉化•╃↟✘╃,將損失降到低☁·。 
NMY51 感受態細胞100ul*50操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1 取感受態細胞置於冰浴中•╃↟✘╃,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中•╃↟✘╃,置於冰浴中☁·。

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