*0F感受態細胞規格

*0F感受態細胞規格

操作方法▩│：（以下操作均按無菌條件的標準進行） 
1 ₪│◕、將感受態細胞置於冰上融化•╃↟✘╃，以下實驗以 100ul 感受態細胞為例☁·。 
2 ₪│◕、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA•╃↟✘╃，注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一•╃↟✘╃，輕輕旋轉離心管以混勻內容物•╃↟✘╃，冰浴放置30 分鐘☁·。 
3 ₪│◕、將離心管置於 42℃水浴中放置 60-90 秒•╃↟✘╃，然後快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘•╃↟✘╃，注意不要搖動離心管☁·。 
4 ₪│◕、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養基•╃↟✘╃，37℃ 180rpm 振盪培養1 小時☁·。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達•╃↟✘╃，使菌體復甦☁·。 
5 ₪│◕、取適量已轉化的感受態細胞塗布含相應抗生素的 SOC 或LB平板•╃↟✘╃，37℃倒置培養 12-16 小時☁·。塗布用量可根據具體實驗來調整•╃↟✘╃，如轉化的DNA總量較多•╃↟✘╃，可取100ul 左右的轉化產物塗板；反之•╃↟✘╃，如轉化的 DNA總量較少•╃↟✘╃，可取200-300ul 的轉化產物塗板☁·。過多菌液可以抑制細菌生長☁·。如果預計的*較少•╃↟✘╃，可透過離心後吸除部分培養液•╃↟✘╃，懸浮菌體後將其塗布於一個平板中☁·。塗布剩餘的菌液可4 ℃儲存•╃↟✘╃，如果次日的轉化菌落數過少•╃↟✘╃，可以將剩下的菌液再塗布新的平板☁·。 

●  一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl•╃↟✘╃，可以根據實際情況分裝使用☁·。應注意所用DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一☁·。
以下實驗以100 μl感受態細胞為例☁·。
*0感受態細胞  向感受態細胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態細胞能夠被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽和）•╃↟✘╃，輕輕旋轉離心管以混勻內容物•╃↟✘╃，在冰浴中靜置30 分鐘☁·。
3 將離心管置於42℃水浴中放置60-90 秒•╃↟✘╃，然後快速將管轉移到冰浴中•╃↟✘╃，使細胞冷卻2-3 分鐘•╃↟✘╃，該過程不要搖動離心管☁·。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養基（不含抗生素）•╃↟✘╃， 混勻後置於37℃搖床振盪培養1 小時（160-220 轉/分鐘）•╃↟✘╃，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達•╃↟✘╃，使菌體復甦☁·。
*0F感受態細胞規格 將離心管內容物混勻•╃↟✘╃，吸取100 μl 已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上•╃↟✘╃，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻塗開☁·。將平板置於室溫直至液體被吸收•╃↟✘╃，倒置平板•╃↟✘╃，37℃培養12-16 小時☁·。
●  塗布用量可根據具體實驗來調整☁·。如轉化的DNA 總量較多•╃↟✘╃，可取更少量轉化產物塗布平板；反之•╃↟✘╃，如轉化的DNA 總量較少•╃↟✘╃，可取200-300 μl 轉化產物塗布平板☁·。如果預計的克隆較少•╃↟✘╃，可透過離心（4,000 rpm, 2分鐘）後吸除部分培養液•╃↟✘╃，懸浮菌體後將其塗布於一個平板中☁·。（塗布剩餘的菌液可置於4℃儲存•╃↟✘╃，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再塗布新的培養板）

注意事項▩│：  
 1₪│◕、感受態細胞應儲存在-70 ℃•╃↟✘╃，不可反覆凍融•╃↟✘╃，否則其轉化效率將會降低☁·。  
 2₪│◕、實驗過程中應嚴格無菌操作•╃↟✘╃，防止其它 DNA的汙染•╃↟✘╃，避免為以後的篩選₪│◕、鑑定帶來影響☁·。  
 3₪│◕、轉化時•╃↟✘╃，轉化效率與外源 DNA的濃度在一定範圍內成正比•╃↟✘╃，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率☁·。轉化時DNA體積要小於感受態細胞體積的十分之一☁·。  
 4₪│◕、轉化率的計算▩│：轉化率＝產生菌落的總數/ 鋪板DNA總量☁·。  
 5₪│◕、為防止轉化實驗不成功•╃↟✘╃，可以保留部分連線產物•╃↟✘╃，以重新轉化•╃↟✘╃，將損失降到低☁·。 
NMY51 感受態細胞100ul*50操作方法（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1 取感受態細胞置於冰浴中•╃↟✘╃，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中•╃↟✘╃，置於冰浴中☁·。