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*0感受態細胞 20×100ul非電轉

更新時間·│▩│↟:2019-11-20

簡要描述·│▩│↟:

*0感受態細胞 20×100ul非電轉
本公司生產的E+ DH5α感受態細胞是採用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝製備得到☁•,具有無需繁瑣的冰浴▩·、熱擊程式☁•,簡單快速的進行質粒DNA的轉化•↟₪✘◕。使用pUC19 質粒檢測☁•,轉化效率zui高可達 2×107cfu/μg☁•,-80℃儲存 3-5 個月轉化效率不發生改變•↟₪✘◕。

*0感受態細胞 20×100ul非電轉

 產品編號 產品名稱規格 價格 
 CY1100 DH5α感受態細胞 20×100 μl 300.00


操作方法·│▩│↟:(以下操作均按無菌條件的標準進行) 
1 ▩·、將感受態細胞置於冰上融化☁•,以下實驗以 100ul 感受態細胞為例•↟₪✘◕。 
2 ▩·、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA☁•,注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一☁•,輕輕旋轉離心管以混勻內容物☁•,冰浴放置30 分鐘•↟₪✘◕。 
3 ▩·、將離心管置於 42℃水浴中放置 60-90 秒☁•,然後快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘☁•,注意不要搖動離心管•↟₪✘◕。 
4 ▩·、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養基☁•,37℃ 180rpm 振盪培養1 小時•↟₪✘◕。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達☁•,使菌體復甦•↟₪✘◕。 
5 ▩·、取適量已轉化的感受態細胞塗布含相應抗生素的 SOC 或LB平板☁•,37℃倒置培養 12-16 小時•↟₪✘◕。塗布用量可根據具體實驗來調整☁•,如轉化的DNA總量較多☁•,可取100ul 左右的轉化產物塗板;反之☁•,如轉化的 DNA總量較少☁•,可取200-300ul 的轉化產物塗板•↟₪✘◕。過多菌液可以抑制細菌生長•↟₪✘◕。如果預計的*較少☁•,可透過離心後吸除部分培養液☁•,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中•↟₪✘◕。塗布剩餘的菌液可4 ℃儲存☁•,如果次日的轉化菌落數過少☁•,可以將剩下的菌液再塗布新的平板•↟₪✘◕。 
注意事項·│▩│↟:  
 1▩·、感受態細胞應儲存在-70 ℃☁•,不可反覆凍融☁•,否則其轉化效率將會降低•↟₪✘◕。  
 2▩·、實驗過程中應嚴格無菌操作☁•,防止其它 DNA的汙染☁•,避免為以後的篩選▩·、鑑定帶來影響•↟₪✘◕。  
 3▩·、轉化時☁•,轉化效率與外源 DNA的濃度在一定範圍內成正比☁•,但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率•↟₪✘◕。轉化時DNA體積要小於感受態細胞體積的十分之一•↟₪✘◕。  
 4▩·、轉化率的計算·│▩│↟:轉化率=產生菌落的總數/ 鋪板DNA總量•↟₪✘◕。  
 5▩·、為防止轉化實驗不成功☁•,可以保留部分連線產物☁•,以重新轉化☁•,將損失降到低•↟₪✘◕。 
NMY51 感受態細胞100ul*50操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1 取感受態細胞置於冰浴中☁•,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中☁•,置於冰浴中•↟₪✘◕。
●  一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl☁•,可以根據實際情況分裝使用•↟₪✘◕。應注意所用DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一•↟₪✘◕。
以下實驗以100 μl感受態細胞為例•↟₪✘◕。

*0感受態細胞  向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態細胞能夠被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽和)☁•,輕輕旋轉離心管以混勻內容物☁•,在冰浴中靜置30 分鐘•↟₪✘◕。
3 將離心管置於42℃水浴中放置60-90 秒☁•,然後快速將管轉移到冰浴中☁•,使細胞冷卻2-3 分鐘☁•,該過程不要搖動離心管•↟₪✘◕。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養基(不含抗生素)☁•, 混勻後置於37℃搖床振盪培養1 小時(160-220 轉/分鐘)☁•,目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達☁•,使菌體復甦•↟₪✘◕。

*0感受態細胞 20×100ul非電轉 將離心管內容物混勻☁•,吸取100 μl 已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上☁•,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻塗開•↟₪✘◕。將平板置於室溫直至液體被吸收☁•,倒置平板☁•,37℃培養12-16 小時•↟₪✘◕。
●  塗布用量可根據具體實驗來調整•↟₪✘◕。如轉化的DNA 總量較多☁•,可取更少量轉化產物塗布平板;反之☁•,如轉化的DNA 總量較少☁•,可取200-300 μl 轉化產物塗布平板•↟₪✘◕。如果預計的克隆較少☁•,可透過離心(4,000 rpm, 2分鐘)後吸除部分培養液☁•,懸浮菌體後將其塗布於一個平板中•↟₪✘◕。(塗布剩餘的菌液可置於4℃儲存☁•,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再塗布新的培養板)

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