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MKN45-LUC人胃癌細胞-熒光素酶標記STR鑑定

更新時間↟╃✘│:2019-08-23

簡要描述↟╃✘│:

MKN45-LUC人胃癌細胞-熒光素酶標記STR鑑定
我公司提供原代細胞◕╃•、細胞系◕╃•、細胞株和菌種╃•╃◕,細胞庫管理規範╃•╃◕,提供的細胞株背景清楚╃•╃◕,提供參考文獻和*培養條件☁◕◕▩。純度可達 90%以上╃•╃◕,且不含有 HIV-1◕╃•、HBV◕╃•、 HCV◕╃•、支原體◕╃•、細菌◕╃•、酵母和真菌等☁◕◕▩。
規格↟╃✘│:&am;amp;amp;amp;#215;100000cells/ml瓶╃•╃◕,細胞可以達到15倍增

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發◕╃•、生產◕╃•、經營為一體的專業化生物工程公司☁◕◕▩。公司新引進細胞上千株╃•╃◕,其中人的已透過STR鑑定的有幾百株╃•╃◕,歡迎各位選購☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。

公司所有產品詳情請點選☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。☁◕◕▩。

產品名稱↟╃✘│:MKN45-LUC人胃癌細胞-熒光素酶標記STR鑑定

包裝↟╃✘│:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源↟╃✘│:ATCC◕╃•、sciencell◕╃•、ICLC
貨期↟╃✘│:1-2周
運輸方式↟╃✘│:快遞運輸
售後↟╃✘│:收到細胞後12天╃•╃◕,如發現細胞有質量問題(如汙染╃•╃◕,死亡╃•╃◕,快遞運輸等原因)時╃•╃◕,應出具書面質量問題報告並及時通知銷售人員╃•╃◕,我們將盡快為您解決₪•╃•₪!

  • MKN45-LUC人胃癌細胞-熒光素酶標記STR鑑定
  • 三◕╃•、細胞生長條件↟╃✘│:

 

  • 組成↟╃✘│:

組份

數目

細胞

 1 T-25瓶

細胞說明書

一份

  • 細胞簡介↟╃✘│:

生長特性↟╃✘│:

貼壁生長

 

細胞來源↟╃✘│:

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件↟╃✘│:

培養基↟╃✘│:1640 +10%FBS(推薦德國BI 04-002-1A

優等胎牛血清)

氣相↟╃✘│:空氣95%╃•╃◕,二氧化碳5%

溫度↟╃✘│:37℃

培養↟╃✘│:

  • 貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒╃•╃◕,將其平躺置於培養箱中進行2-3小時的緩衝╃•╃◕,.然後置於無菌操作檯╃•╃◕,開啟瓶口╃•╃◕,將其中的培養液去掉╃•╃◕,再往其中加入5-6mL新鮮培養基並置於細胞培養箱中培養╃•╃◕,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%╃•╃◕,需要對其進行傳代╃•╃◕,*次傳代比例為1:2☁◕◕▩。

3傳代步驟↟╃✘│:將0.25%含EDTA胰酶置於37°預熱╃•╃◕,倒掉培養瓶中的培養基╃•╃◕,往培養瓶中加入1mlPBS╃•╃◕,輕晃洗滌後棄去☁◕◕▩。往瓶中加1ml預熱好的胰酶╃•╃◕,置於37°孵育消化(*次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察╃•╃◕,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓◕╃•、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間╃•╃◕,記錄*消化時間╃•╃◕,以便於下次消化)╃•╃◕,消化好後加入1ml*培養基終止消化☁◕◕▩。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞╃•╃◕,使之*脫落╃•╃◕,然後收集細胞懸液╃•╃◕,1200rpm離心3min╃•╃◕,棄上清╃•╃◕,加入*培養基重懸細胞╃•╃◕,進行傳代☁◕◕▩。

 

二◕╃•、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒╃•╃◕,然後置於無菌操作檯╃•╃◕,開啟瓶口╃•╃◕,輕輕吹打後╃•╃◕,將其中的細胞懸液轉移到離心管中╃•╃◕,然後1200rpm離心3min╃•╃◕,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中╃•╃◕,並加入5-6mL新鮮培養基╃•╃◕,然後將其置於細胞培養箱中培養╃•╃◕,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心後去舊液╃•╃◕,加入新鮮培養基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時╃•╃◕,對其進行傳代╃•╃◕,*次傳代比例為1:2(離心後平均分成兩瓶培養)☁◕◕▩。

 

細胞總數↟╃✘│:

1~3*106

傳代週期↟╃✘│:

2-3天

傳代比例↟╃✘│:

1:2~1:4

換液頻率↟╃✘│:

2-3天

凍存液↟╃✘│:

90%FBS+10%DMSO

 

四◕╃•、注意事項↟╃✘│:

1 收到細胞後首先觀察T-25瓶是否有損壞◕╃•、漏液◕╃•、渾濁等現象╃•╃◕,若有上述現象發生請及時和我們聯絡☁◕◕▩。

2 瓶中運輸的培養液不能重複使用╃•╃◕,請換新鮮培養液培養

3 對於貼壁細胞╃•╃◕,若大部分細胞漂浮╃•╃◕,置於培養箱隔夜觀察╃•╃◕,大部分漂浮細胞重新貼壁╃•╃◕,表明細胞活力正常╃•╃◕,繼續培養╃•╃◕,剩餘漂浮的細胞可以去掉;若大部分細胞仍然不貼壁╃•╃◕,將漂浮的細胞離心收集╃•╃◕,用臺盼藍染色鑑定細胞活力╃•╃◕,並與本公司銷售人員及時聯絡☁◕◕▩。

4 建議客戶收到細胞後不同倍鏡各拍幾張細胞的照片╃•╃◕,記錄細胞狀態╃•╃◕,如細胞狀態出現問題請於72h內與本公司銷售聯絡╃•╃◕,以便於更好的幫您解決問題╃•╃◕,超過時間我段╃•╃◕,本公司則預設細胞狀態良好╃•╃◕,不免費對後續細胞狀態問題進行售後☁◕◕▩。

 

做細胞實驗的同學看過來☁◕◕▩。

選擇上海琛藝生物細胞有3個理由↟╃✘│:

1◕╃•、細胞狀態好╃•╃◕,形態佳╃•╃◕,易成活╃•╃◕,是市面上比較好養的細胞之一;

2◕╃•、物流迅速╃•╃◕,復甦好後發貨╃•╃◕,次日就能到;

3◕╃•、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養實驗╃•╃◕,效果更佳☁◕◕▩。

 

細胞保種心得↟╃✘│:

首先╃•╃◕,細胞採購的運輸形式一般分為兩種╃•╃◕,一種是直接寄送凍存細胞╃•╃◕,一種是復甦後寄送活細胞☁◕◕▩。前者是由液氮中取出細胞凍存管╃•╃◕,採用乾冰運輸;後者是將細胞復甦至T-25培養瓶中╃•╃◕,採用常溫運輸☁◕◕▩。兩者各有優缺點╃•╃◕,*種方式的優點是可以長途運輸╃•╃◕,因為細胞在乾冰中相對穩定╃•╃◕,一般可以保證數週之內不影響細胞活性╃•╃◕,但缺點是運輸成本高╃•╃◕,且細胞復甦是很複雜的過程╃•╃◕,如果細胞復甦後狀態不佳╃•╃◕,則很難界定是來源的問題還是復甦操作的問題;而第二種方式的優點是細胞收到後可以直接透過觀察來大體瞭解細胞狀態╃•╃◕,並且對運輸的要求相對較低╃•╃◕,缺點則是隻適合短途運輸╃•╃◕,因為即便運輸時培養基中不新增血清╃•╃◕,細胞還是會不斷增殖╃•╃◕,當細胞長滿後╃•╃◕,細胞的狀態會隨時間的增加而不斷變差☁◕◕▩。綜上╃•╃◕,如果是從國外大型細胞庫採購╃•╃◕,一般採用*種方法╃•╃◕,既能適應長途運輸╃•╃◕,且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好╃•╃◕,在良好的操作下復甦成活率很高;如果是從國內細胞庫採購╃•╃◕,則一般採用第二種方法╃•╃◕,方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態╃•╃◕,並且降低運輸成本☁◕◕▩。

細胞分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程↟╃✘│:

對於直接寄送凍存細胞的情況╃•╃◕,首先要檢查的就是細胞收到後是否有足量剩餘乾冰╃•╃◕,如果幹冰不足╃•╃◕,或是已經沒有乾冰╃•╃◕,則細胞狀態可能會收到影響╃•╃◕,建議儘快復甦;如果有足量乾冰╃•╃◕,建議先轉移至-80℃冰箱過夜╃•╃◕,於第二天按正常流程復甦╃•╃◕,即37℃水浴鍋中快速融解╃•╃◕,低速離心後去除含DMSO的凍存液╃•╃◕,換入適合細胞的新鮮培養基╃•╃◕,輕柔吹勻後轉移至培養皿中╃•╃◕,補足培養基;一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁╃•╃◕,從而判斷細胞狀態╃•╃◕,懸浮細胞則復甦後即可觀察細胞狀態☁◕◕▩。對於凍存時間較長的細胞╃•╃◕,可能需要傳代1到2次後╃•╃◕,細胞才會調整到正常狀態╃•╃◕,所以細胞復甦後如果狀態不佳╃•╃◕,不要灰心╃•╃◕,仍要細心培養☁◕◕▩。

對於復甦後寄送活細胞的情況╃•╃◕,則細胞收到後要先檢查細胞瓶是否有破損╃•╃◕,細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓╃•╃◕,導致瓶體受損☁◕◕▩。如果發現細胞瓶受損╃•╃◕,則需要儘快處理╃•╃◕,該棄就棄☁◕◕▩。如果細胞瓶完好╃•╃◕,則用酒精消毒瓶身╃•╃◕,去除封口膜╃•╃◕,然後置於37℃培養箱中靜置1-2h☁◕◕▩。待細胞穩定後╃•╃◕,觀察細胞狀態╃•╃◕,並及時記錄╃•╃◕,因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態的╃•╃◕,如果收到時細胞狀態不佳甚至汙染╃•╃◕,是可以要求重新寄送的☁◕◕▩。細胞如沒有異常╃•╃◕,則儘快傳代並更換適合細胞的新鮮培養基☁◕◕▩。由於新細胞一般都是*次接觸╃•╃◕,細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間╃•╃◕,消化時間過短或過長都會影響細胞狀態╃•╃◕,甚至導致細胞死亡☁◕◕▩。我建議大家採用低濃度胰酶消化╃•╃◕,消化時縮短放培養箱和觀察的間隔時間╃•╃◕,以便儘可能找到合適的消化時間☁◕◕▩。

因此培養在有膠原的底物上可能利於生長╃•╃◕,另外人或小鼠表皮在以3T3細胞為飼養層(用射線照射後)時╃•╃◕,細胞易生長並可發生一定程度的分化現象☁◕◕▩。降低PH◕╃•、Ca2 含量和溫度╃•╃◕,向培養基中加入表皮生長因子╃•╃◕,均有利於表皮細胞生長☁◕◕▩。

 以表皮細胞為例╃•╃◕,用皮膚表皮和真皮分離培養法可獲得純上皮細胞╃•╃◕,方法如下↟╃✘│:

1◕╃•、取材↟╃✘│:外科植皮或手術殘餘皮膚小塊╃•╃◕,早產流產兒皮膚更好╃•╃◕,去角化層薄者╃•╃◕,切成0.5-1平方釐米小塊☁◕◕▩。

2◕╃•、置0.02%EDTA中╃•╃◕,室溫╃•╃◕,5分鐘☁◕◕▩。

3◕╃•、換入0.25%胰蛋白酶中╃•╃◕,4攝氏度過夜☁◕◕▩。

4◕╃•、分離↟╃✘│:取出皮塊╃•╃◕,用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開☁◕◕▩。

5◕╃•、取出表皮╃•╃◕,剪成更小的塊後╃•╃◕,置0.25&胰酶中╃•╃◕,37攝氏度╃•╃◕,30-60分鐘☁◕◕▩。

6◕╃•、反覆吹打╃•╃◕,製成懸液☁◕◕▩。

7◕╃•、培養↟╃✘│:用80目不鏽鋼紗網濾過後╃•╃◕,低速離心╃•╃◕,吸去上清☁◕◕▩。

8◕╃•、直接加入培養基細胞懸液╃•╃◕,接種入培養瓶╃•╃◕,CO2溫箱培養☁◕◕▩。主要的客戶是醫學院校╃•╃◕,做實行面向的種屬重要是人╃•╃◕,大鼠和小鼠╃•╃◕,如今市面市情上雞◕╃•、牛◕╃•、馬◕╃•、羊◕╃•、兔種種指標的盒子都有售╃•╃◕,真不知道這些抗體是怎麼來的☁◕◕▩。據我所相識╃•╃◕,這些炎症指標依然有很大種屬特異性的☁◕◕▩。

 

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