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L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR

更新時間•↟:2019-08-19

簡要描述•↟:

【中文名稱】L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR
【背景資料】 見細胞說明書
【產品來源】 細胞主要來源ATCC•◕、DSMZ•◕、ECACC•◕、RIKEN•◕、promocell•◕、ScienCell•◕、ECACC•◕、JCRB•◕、KCLB•◕、Asterand•◕、ICLC以及少數國內外著名大學建系
“公司提供貼壁•◕、半貼壁•◕、懸浮•◕、半懸浮•◕、貼壁與懸浮混合等細胞特性•✘↟╃,一般細胞培養FBS
量是10%

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發•◕、生產•◕、經營為一體的專業化生物工程公司·✘◕╃。公司新引進細胞上千株•✘↟╃,其中人的已透過STR鑑定的有幾百株•✘↟╃,歡迎各位選購·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。

細胞名稱•↟:L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR

培養條件•↟:DMEM +10% FBS

形       態•↟:貼壁;上皮細胞樣

“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間•✘↟╃,與細胞世代或倍增不同·✘◕╃。在一代中•✘↟╃,細胞培增3~6次·✘◕╃。細胞傳代後•✘↟╃,一般經過三個階段•↟:遊離期•◕、指數增生期和停止期·✘◕╃。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度•✘↟╃,即細胞群的分裂相數/100個細胞·✘◕╃。一般細胞分裂指數介於0.2%~0.5%•✘↟╃,腫瘤細胞可達3~5%·✘◕╃。接種2~3天分裂增殖旺盛•✘↟╃,是活力時期•✘↟╃,稱指數增生期(對數生長期)•✘↟╃,適宜進行各種試驗·✘◕╃。

formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失•✘↟╃,不能將MTT還原)·✘◕╃。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲醯胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解•✘↟╃,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值•✘↟╃,以反映出活細胞數目·✘◕╃。也可以用DMSO來溶解·✘◕╃。MTT粉末和溶液儲存時都需要避光•✘↟╃,用鋁箔紙包好就可以·✘◕╃。實驗的時候一般關閉超淨臺上的日光燈來避光•✘↟╃,覺得這樣比較好·✘◕╃。

L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR培養說明書

 

  • 組成•↟:

組份

數目

細胞

 1 T-25瓶

細胞說明書

一份

  • 細胞簡介•↟:

生長特性•↟:

貼壁生長

 

細胞來源•↟:

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件•↟:

培養基•↟:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推薦德國SERANA S-FBS-SA-015優等胎牛血清)

氣相•↟:空氣95%•✘↟╃,二氧化碳5%

溫度•↟:37℃

培養•↟:

  • 貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒•✘↟╃,將其平躺置於培養箱中進行2-3小時的緩衝•✘↟╃,.然後置於無菌操作檯•✘↟╃,開啟瓶口•✘↟╃,將其中的培養液去掉•✘↟╃,再往其中加入5-6mL新鮮培養基並置於細胞培養箱中培養•✘↟╃,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%•✘↟╃,需要對其進行傳代•✘↟╃,*次傳代比例為1:2·✘◕╃。

3傳代步驟•↟:將0.25%含EDTA胰酶置於37°預熱•✘↟╃,倒掉培養瓶中的培養基•✘↟╃,往培養瓶中加入1mlPBS•✘↟╃,輕晃洗滌後棄去·✘◕╃。往瓶中加1ml預熱好的胰酶•✘↟╃,置於37°孵育消化(*次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察•✘↟╃,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓•◕、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間•✘↟╃,記錄*消化時間•✘↟╃,以便於下次消化)•✘↟╃,消化好後加入1ml*培養基終止消化·✘◕╃。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞•✘↟╃,使之*脫落•✘↟╃,然後收集細胞懸液•✘↟╃,1200rpm離心3min•✘↟╃,棄上清•✘↟╃,加入*培養基重懸細胞•✘↟╃,進行傳代·✘◕╃。

 

二•◕、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒•✘↟╃,然後置於無菌操作檯•✘↟╃,開啟瓶口•✘↟╃,輕輕吹打後•✘↟╃,將其中的細胞懸液轉移到離心管中•✘↟╃,然後1200rpm離心3min•✘↟╃,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中•✘↟╃,並加入5-6mL新鮮培養基•✘↟╃,然後將其置於細胞培養箱中培養•✘↟╃,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心後去舊液•✘↟╃,加入新鮮培養基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時•✘↟╃,對其進行傳代•✘↟╃,*次傳代比例為1:2(離心後平均分成兩瓶培養)·✘◕╃。

 

細胞總數•↟:

1~3*106

傳代週期•↟:

2-3天

傳代比例•↟:

1:2~1:4

換液頻率•↟:

2-3天

凍存液•↟:

90%FBS+10%DMSO

細胞培養過程中遇到的問題•↟:

1. 為什麼培養的細胞要及時傳代•◕││▩?
    答•↟:體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性•✘↟╃,也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候•✘↟╃,它就會停止生長•✘↟╃,及時傳代後•✘↟╃,細胞的生長得以繼續·✘◕╃。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些•◕││▩?其解決辦法是什麼•◕││▩?
    答•↟:通常細胞生長得非常快時•✘↟╃,pH值通常下降得很快·✘◕╃。此時可以及時傳代•◕、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決·✘◕╃。此外•✘↟╃,培養瓶蓋擰得太緊•◕、NaHCO3 緩衝系統緩衝能力不夠•◕、培養液中鹽濃度不正確•◕、細菌•◕、酵母或真菌汙染等也能導致pH值通常下降得很快·✘◕╃。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度•✘↟╃,2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%·✘◕╃。
       (2)改用不依賴CO2培養液·✘◕╃。
       (3)鬆開瓶蓋1/4 圈·✘◕╃。加HEPES 緩衝液至10 到25mM終濃度·✘◕╃。
       (4)在CO2 培養環境中改用基於Earle′s 鹽配製的培養液•✘↟╃,在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配製的培養液·✘◕╃。
       (5)如果是汙染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌·✘◕╃。
3.培養液pH對細胞生長的影響•◕││▩?
    答•↟:由於大多數細胞適宜pH為7.2-7.4•✘↟╃,偏離此範圍可能對細胞生長將產生有害的影響·✘◕╃。但各種細胞對pH的要求也不*相同•✘↟╃,原代培養細胞一般對pH變動耐受差•✘↟╃,無限細胞系耐受力強·✘◕╃。但總體來說•✘↟╃,細胞耐酸性比耐鹼性強一些·✘◕╃。在配製培養用液時•✘↟╃,需要注意一點•↟:培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時•✘↟╃,溶液的pH還會向上浮動0.2左右·✘◕╃。
4.購買之細胞冷凍管經解凍後•✘↟╃,為何會發生細胞數目太少之情形•◕││▩?
    答•↟:研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少•✘↟╃,大都是因為離心過程操作上的失誤•✘↟╃,造成細胞的物理性損傷•✘↟╃,以及細胞流失·✘◕╃。建議細胞解凍後不要立刻離心•✘↟╃,應待細胞生長隔夜後再更換培養基即可·✘◕╃。但對於DMSO敏感的細胞•✘↟╃,還是復甦細胞時•✘↟╃,用離心去除DMSO比較好·✘◕╃。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因•◕││▩?
    答•↟:研究人員在細胞培養時出現存活率不佳•✘↟╃,原因比較複雜•✘↟╃,常見原因可歸納為•↟:培養基使用錯誤或培養基品質不佳;血清使用錯誤或血清的品質不佳;解凍過程錯誤;冷凍細胞解凍後•✘↟╃,加以洗滌細胞和離心;懸浮細胞誤認為死細胞;培養溫度使用錯誤;細胞置於–80 ℃太久等·✘◕╃。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復甦•◕、凍存等工作·✘◕╃。
6.支原體汙染會對細胞培養有何影響•◕││▩?
    答•↟:支原體汙染幾乎可影響所有細胞之生長引數•◕、代謝及研究之任一資料·✘◕╃。故進行實驗前•✘↟╃,必須確認細胞為mycoplasma-free•✘↟╃,實驗結果之資料方有意義·✘◕╃。

 

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