L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR

更新時間•↟：2019-08-19

簡要描述•↟：

【中文名稱】L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR
【背景資料】見細胞說明書
【產品來源】細胞主要來源ATCC•◕、DSMZ•◕、ECACC•◕、RIKEN•◕、promocell•◕、ScienCell•◕、ECACC•◕、JCRB•◕、KCLB•◕、Asterand•◕、ICLC以及少數國內外著名大學建系
“公司提供貼壁•◕、半貼壁•◕、懸浮•◕、半懸浮•◕、貼壁與懸浮混合等細胞特性•✘↟╃，一般細胞培養FBS
量是10%

發郵件給我們•↟：1476759815@qq.com

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發•◕、生產•◕、經營為一體的專業化生物工程公司·✘◕╃。公司新引進細胞上千株•✘↟╃，其中人的已透過STR鑑定的有幾百株•✘↟╃，歡迎各位選購·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。·✘◕╃。

細胞名稱•↟：L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR

培養條件•↟：DMEM +10% FBS

形態•↟：貼壁；上皮細胞樣

“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間•✘↟╃，與細胞世代或倍增不同·✘◕╃。在一代中•✘↟╃，細胞培增3～6次·✘◕╃。細胞傳代後•✘↟╃，一般經過三個階段•↟：遊離期•◕、指數增生期和停止期·✘◕╃。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度•✘↟╃，即細胞群的分裂相數／100個細胞·✘◕╃。一般細胞分裂指數介於0.2％～0.5％•✘↟╃，腫瘤細胞可達3～5％·✘◕╃。接種2～3天分裂增殖旺盛•✘↟╃，是活力時期•✘↟╃，稱指數增生期(對數生長期)•✘↟╃，適宜進行各種試驗·✘◕╃。

formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失•✘↟╃，不能將MTT還原）·✘◕╃。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲醯胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解•✘↟╃，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值•✘↟╃，以反映出活細胞數目·✘◕╃。也可以用DMSO來溶解·✘◕╃。MTT粉末和溶液儲存時都需要避光•✘↟╃，用鋁箔紙包好就可以·✘◕╃。實驗的時候一般關閉超淨臺上的日光燈來避光•✘↟╃，覺得這樣比較好·✘◕╃。

L1210-LUC小鼠白血病細胞-熒光素酶標記 STR培養說明書

組成•↟：

組份	數目
細胞	1 T-25瓶
細胞說明書	一份

細胞簡介•↟：

生長特性•↟：	貼壁生長
細胞來源•↟：	從ATCC/中科院/協和醫院等地引進
培養條件•↟：	培養基•↟：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（推薦德國SERANA S-FBS-SA-015優等胎牛血清）氣相•↟：空氣95%•✘↟╃，二氧化碳5% 溫度•↟：37℃
培養•↟：	貼壁細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒•✘↟╃，將其平躺置於培養箱中進行2-3小時的緩衝•✘↟╃，.然後置於無菌操作檯•✘↟╃，開啟瓶口•✘↟╃，將其中的培養液去掉•✘↟╃，再往其中加入5-6mL新鮮培養基並置於細胞培養箱中培養•✘↟╃，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代； 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%•✘↟╃，需要對其進行傳代•✘↟╃，次傳代比例為1:2·✘◕╃。 3傳代步驟•↟：將0.25%含EDTA胰酶置於37°預熱•✘↟╃，倒掉培養瓶中的培養基•✘↟╃，往培養瓶中加入1mlPBS•✘↟╃，輕晃洗滌後棄去·✘◕╃。往瓶中加1ml預熱好的胰酶•✘↟╃，置於37°孵育消化（次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察•✘↟╃，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓•◕、輕拍瓶壁見細胞脫落為消化時間•✘↟╃，記錄消化時間•✘↟╃，以便於下次消化）•✘↟╃，消化好後加入1ml培養基終止消化·✘◕╃。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞•✘↟╃，使之脫落•✘↟╃，然後收集細胞懸液•✘↟╃，1200rpm離心3min•✘↟╃，棄上清•✘↟╃，加入培養基重懸細胞•✘↟╃，進行傳代·✘◕╃。二•◕、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒•✘↟╃，然後置於無菌操作檯•✘↟╃，開啟瓶口•✘↟╃，輕輕吹打後•✘↟╃，將其中的細胞懸液轉移到離心管中•✘↟╃，然後1200rpm離心3min•✘↟╃，去上清； 2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中•✘↟╃，並加入5-6mL新鮮培養基•✘↟╃，然後將其置於細胞培養箱中培養•✘↟╃，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液（離心後去舊液•✘↟╃，加入新鮮培養基）； 3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時•✘↟╃，對其進行傳代•✘↟╃，次傳代比例為1:2（離心後平均分成兩瓶培養）·✘◕╃。
細胞總數•↟：	1~3*10⁶
傳代週期•↟：	2-3天
傳代比例•↟：	1:2~1:4
換液頻率•↟：	2-3天
凍存液•↟：	90%FBS+10%DMSO

細胞培養過程中遇到的問題•↟：

1. 為什麼培養的細胞要及時傳代•◕││▩？
    答•↟：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性•✘↟╃，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候•✘↟╃，它就會停止生長•✘↟╃，及時傳代後•✘↟╃，細胞的生長得以繼續·✘◕╃。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些•◕││▩？其解決辦法是什麼•◕││▩？
    答•↟：通常細胞生長得非常快時•✘↟╃，pH值通常下降得很快·✘◕╃。此時可以及時傳代•◕、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決·✘◕╃。此外•✘↟╃，培養瓶蓋擰得太緊•◕、NaHCO3 緩衝系統緩衝能力不夠•◕、培養液中鹽濃度不正確•◕、細菌•◕、酵母或真菌汙染等也能導致pH值通常下降得很快·✘◕╃。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度•✘↟╃，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％·✘◕╃。
       (2)改用不依賴CO2培養液·✘◕╃。
       (3)鬆開瓶蓋1/4 圈·✘◕╃。加HEPES 緩衝液至10 到25mM終濃度·✘◕╃。
       (4)在CO2 培養環境中改用基於Earle′s 鹽配製的培養液•✘↟╃，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配製的培養液·✘◕╃。
       (5)如果是汙染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌·✘◕╃。
3.培養液pH對細胞生長的影響•◕││▩？
    答•↟：由於大多數細胞適宜pH為7.2-7.4•✘↟╃，偏離此範圍可能對細胞生長將產生有害的影響·✘◕╃。但各種細胞對pH的要求也不*相同•✘↟╃，原代培養細胞一般對pH變動耐受差•✘↟╃，無限細胞系耐受力強·✘◕╃。但總體來說•✘↟╃，細胞耐酸性比耐鹼性強一些·✘◕╃。在配製培養用液時•✘↟╃，需要注意一點•↟：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時•✘↟╃，溶液的pH還會向上浮動0.2左右·✘◕╃。
4.購買之細胞冷凍管經解凍後•✘↟╃，為何會發生細胞數目太少之情形•◕││▩？
    答•↟：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少•✘↟╃，大都是因為離心過程操作上的失誤•✘↟╃，造成細胞的物理性損傷•✘↟╃，以及細胞流失·✘◕╃。建議細胞解凍後不要立刻離心•✘↟╃，應待細胞生長隔夜後再更換培養基即可·✘◕╃。但對於DMSO敏感的細胞•✘↟╃，還是復甦細胞時•✘↟╃，用離心去除DMSO比較好·✘◕╃。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因•◕││▩？
    答•↟：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳•✘↟╃，原因比較複雜•✘↟╃，常見原因可歸納為•↟：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍後•✘↟╃，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置於–80 ℃太久等·✘◕╃。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復甦•◕、凍存等工作·✘◕╃。
6.支原體汙染會對細胞培養有何影響•◕││▩？
    答•↟：支原體汙染幾乎可影響所有細胞之生長引數•◕、代謝及研究之任一資料·✘◕╃。故進行實驗前•✘↟╃，必須確認細胞為mycoplasma-free•✘↟╃，實驗結果之資料方有意義·✘◕╃。