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L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光

更新時間·◕₪•:2019-08-19

簡要描述·◕₪•:

【中文名稱】L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光
【背景資料】 見細胞說明書
【產品來源】 細胞主要來源ATCC☁↟╃₪◕、DSMZ☁↟╃₪◕、ECACC☁↟╃₪◕、RIKEN☁↟╃₪◕、promocell☁↟╃₪◕、ScienCell☁↟╃₪◕、ECACC☁↟╃₪◕、JCRB☁↟╃₪◕、KCLB☁↟╃₪◕、Asterand☁↟╃₪◕、ICLC以及少數國內外著名大學建系
“公司提供貼壁☁↟╃₪◕、半貼壁☁↟╃₪◕、懸浮☁↟╃₪◕、半懸浮☁↟╃₪◕、貼壁與懸浮混合等細胞特性☁☁,一般細胞培養FBS
量是10%

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發☁↟╃₪◕、生產☁↟╃₪◕、經營為一體的專業化生物工程公司╃•。公司新引進細胞上千株☁☁,其中人的已透過STR鑑定的有幾百株☁☁,歡迎各位選購╃•。╃•。╃•。╃•。╃•。╃•。

細胞名稱·◕₪•:L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光

培養條件·◕₪•:DMEM +10% FBS

形       態·◕₪•:貼壁;上皮細胞樣

“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間☁☁,與細胞世代或倍增不同╃•。在一代中☁☁,細胞培增3~6次╃•。細胞傳代後☁☁,一般經過三個階段·◕₪•:遊離期☁↟╃₪◕、指數增生期和停止期╃•。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度☁☁,即細胞群的分裂相數/100個細胞╃•。一般細胞分裂指數介於0.2%~0.5%☁☁,腫瘤細胞可達3~5%╃•。接種2~3天分裂增殖旺盛☁☁,是活力時期☁☁,稱指數增生期(對數生長期)☁☁,適宜進行各種試驗╃•。

formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失☁☁,不能將MTT還原)╃•。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲醯胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解☁☁,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值☁☁,以反映出活細胞數目╃•。也可以用DMSO來溶解╃•。MTT粉末和溶液儲存時都需要避光☁☁,用鋁箔紙包好就可以╃•。實驗的時候一般關閉超淨臺上的日光燈來避光☁☁,覺得這樣比較好╃•。

L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光培養說明書

 

  • 組成·◕₪•:

組份

數目

細胞

 1 T-25瓶

細胞說明書

一份

  • 細胞簡介·◕₪•:

生長特性·◕₪•:

貼壁生長

 

細胞來源·◕₪•:

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件·◕₪•:

培養基·◕₪•:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推薦德國SERANA S-FBS-SA-015優等胎牛血清)

氣相·◕₪•:空氣95%☁☁,二氧化碳5%

溫度·◕₪•:37℃

培養·◕₪•:

  • 貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒☁☁,將其平躺置於培養箱中進行2-3小時的緩衝☁☁,.然後置於無菌操作檯☁☁,開啟瓶口☁☁,將其中的培養液去掉☁☁,再往其中加入5-6mL新鮮培養基並置於細胞培養箱中培養☁☁,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%☁☁,需要對其進行傳代☁☁,*次傳代比例為1:2╃•。

3傳代步驟·◕₪•:將0.25%含EDTA胰酶置於37°預熱☁☁,倒掉培養瓶中的培養基☁☁,往培養瓶中加入1mlPBS☁☁,輕晃洗滌後棄去╃•。往瓶中加1ml預熱好的胰酶☁☁,置於37°孵育消化(*次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察☁☁,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓☁↟╃₪◕、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間☁☁,記錄*消化時間☁☁,以便於下次消化)☁☁,消化好後加入1ml*培養基終止消化╃•。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞☁☁,使之*脫落☁☁,然後收集細胞懸液☁☁,1200rpm離心3min☁☁,棄上清☁☁,加入*培養基重懸細胞☁☁,進行傳代╃•。

 

二☁↟╃₪◕、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒☁☁,然後置於無菌操作檯☁☁,開啟瓶口☁☁,輕輕吹打後☁☁,將其中的細胞懸液轉移到離心管中☁☁,然後1200rpm離心3min☁☁,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中☁☁,並加入5-6mL新鮮培養基☁☁,然後將其置於細胞培養箱中培養☁☁,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心後去舊液☁☁,加入新鮮培養基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時☁☁,對其進行傳代☁☁,*次傳代比例為1:2(離心後平均分成兩瓶培養)╃•。

 

細胞總數·◕₪•:

1~3*106

傳代週期·◕₪•:

2-3天

傳代比例·◕₪•:

1:2~1:4

換液頻率·◕₪•:

2-3天

凍存液·◕₪•:

90%FBS+10%DMSO

細胞培養過程中遇到的問題·◕₪•:

1. 為什麼培養的細胞要及時傳代✘│╃₪?
    答·◕₪•:體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性☁☁,也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候☁☁,它就會停止生長☁☁,及時傳代後☁☁,細胞的生長得以繼續╃•。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些✘│╃₪?其解決辦法是什麼✘│╃₪?
    答·◕₪•:通常細胞生長得非常快時☁☁,pH值通常下降得很快╃•。此時可以及時傳代☁↟╃₪◕、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決╃•。此外☁☁,培養瓶蓋擰得太緊☁↟╃₪◕、NaHCO3 緩衝系統緩衝能力不夠☁↟╃₪◕、培養液中鹽濃度不正確☁↟╃₪◕、細菌☁↟╃₪◕、酵母或真菌汙染等也能導致pH值通常下降得很快╃•。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度☁☁,2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%╃•。
       (2)改用不依賴CO2培養液╃•。
       (3)鬆開瓶蓋1/4 圈╃•。加HEPES 緩衝液至10 到25mM終濃度╃•。
       (4)在CO2 培養環境中改用基於Earle′s 鹽配製的培養液☁☁,在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配製的培養液╃•。
       (5)如果是汙染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌╃•。
3.培養液pH對細胞生長的影響✘│╃₪?
    答·◕₪•:由於大多數細胞適宜pH為7.2-7.4☁☁,偏離此範圍可能對細胞生長將產生有害的影響╃•。但各種細胞對pH的要求也不*相同☁☁,原代培養細胞一般對pH變動耐受差☁☁,無限細胞系耐受力強╃•。但總體來說☁☁,細胞耐酸性比耐鹼性強一些╃•。在配製培養用液時☁☁,需要注意一點·◕₪•:培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時☁☁,溶液的pH還會向上浮動0.2左右╃•。
4.購買之細胞冷凍管經解凍後☁☁,為何會發生細胞數目太少之情形✘│╃₪?
    答·◕₪•:研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少☁☁,大都是因為離心過程操作上的失誤☁☁,造成細胞的物理性損傷☁☁,以及細胞流失╃•。建議細胞解凍後不要立刻離心☁☁,應待細胞生長隔夜後再更換培養基即可╃•。但對於DMSO敏感的細胞☁☁,還是復甦細胞時☁☁,用離心去除DMSO比較好╃•。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因✘│╃₪?
    答·◕₪•:研究人員在細胞培養時出現存活率不佳☁☁,原因比較複雜☁☁,常見原因可歸納為·◕₪•:培養基使用錯誤或培養基品質不佳;血清使用錯誤或血清的品質不佳;解凍過程錯誤;冷凍細胞解凍後☁☁,加以洗滌細胞和離心;懸浮細胞誤認為死細胞;培養溫度使用錯誤;細胞置於–80 ℃太久等╃•。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復甦☁↟╃₪◕、凍存等工作╃•。
6.支原體汙染會對細胞培養有何影響✘│╃₪?
    答·◕₪•:支原體汙染幾乎可影響所有細胞之生長引數☁↟╃₪◕、代謝及研究之任一資料╃•。故進行實驗前☁☁,必須確認細胞為mycoplasma-free☁☁,實驗結果之資料方有意義╃•。

 

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