更新時間·◕₪•：2019-08-19
【中文名稱】L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光【背景資料】 見細胞說明書【產品來源】 細胞主要來源ATCC☁↟╃₪◕、DSMZ☁↟╃₪◕、ECACC☁↟╃₪◕、RIKEN☁↟╃₪◕、promocell☁↟╃₪◕、ScienCell☁↟╃₪◕、ECACC☁↟╃₪◕、JCRB☁↟╃₪◕、KCLB☁↟╃₪◕、Asterand☁↟╃₪◕、ICLC以及少數國內外著名大學建系“公司提供貼壁☁↟╃₪◕、半貼壁☁↟╃₪◕、懸浮☁↟╃₪◕、半懸浮☁↟╃₪◕、貼壁與懸浮混合等細胞特性☁☁，一般細胞培養FBS量是10%
上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發☁↟╃₪◕、生產☁↟╃₪◕、經營為一體的專業化生物工程公司╃•。公司新引進細胞上千株☁☁，其中人的已透過STR鑑定的有幾百株☁☁，歡迎各位選購╃•。╃•。╃•。╃•。╃•。╃•。
細胞名稱·◕₪•：L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光
培養條件·◕₪•：DMEM +10% FBS
形 態·◕₪•：貼壁；上皮細胞樣
“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間☁☁，與細胞世代或倍增不同╃•。在一代中☁☁，細胞培增3～6次╃•。細胞傳代後☁☁，一般經過三個階段·◕₪•：遊離期☁↟╃₪◕、指數增生期和停止期╃•。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度☁☁，即細胞群的分裂相數／100個細胞╃•。一般細胞分裂指數介於0.2％～0.5％☁☁，腫瘤細胞可達3～5％╃•。接種2～3天分裂增殖旺盛☁☁，是活力時期☁☁，稱指數增生期(對數生長期)☁☁，適宜進行各種試驗╃•。
formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失☁☁，不能將MTT還原）╃•。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲醯胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解☁☁，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值☁☁，以反映出活細胞數目╃•。也可以用DMSO來溶解╃•。MTT粉末和溶液儲存時都需要避光☁☁，用鋁箔紙包好就可以╃•。實驗的時候一般關閉超淨臺上的日光燈來避光☁☁，覺得這樣比較好╃•。
L1210/DDP-LUC小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光培養說明書
組份 | 數目 |
細胞 | 1 T-25瓶 |
細胞說明書 | 一份 |
生長特性·◕₪•： | 貼壁生長
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細胞來源·◕₪•： | 從ATCC/中科院/協和醫院等地引進 |
培養條件·◕₪•： | 培養基·◕₪•：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（推薦德國SERANA S-FBS-SA-015優等胎牛血清） 氣相·◕₪•：空氣95%☁☁，二氧化碳5% 溫度·◕₪•：37℃ |
培養·◕₪•： |
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒☁☁，將其平躺置於培養箱中進行2-3小時的緩衝☁☁，.然後置於無菌操作檯☁☁，開啟瓶口☁☁，將其中的培養液去掉☁☁，再往其中加入5-6mL新鮮培養基並置於細胞培養箱中培養☁☁，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代； 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%☁☁，需要對其進行傳代☁☁，*次傳代比例為1:2╃•。 3傳代步驟·◕₪•：將0.25%含EDTA胰酶置於37°預熱☁☁，倒掉培養瓶中的培養基☁☁，往培養瓶中加入1mlPBS☁☁，輕晃洗滌後棄去╃•。往瓶中加1ml預熱好的胰酶☁☁，置於37°孵育消化（*次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察☁☁，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓☁↟╃₪◕、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間☁☁，記錄*消化時間☁☁，以便於下次消化）☁☁，消化好後加入1ml*培養基終止消化╃•。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞☁☁，使之*脫落☁☁，然後收集細胞懸液☁☁，1200rpm離心3min☁☁，棄上清☁☁，加入*培養基重懸細胞☁☁，進行傳代╃•。
二☁↟╃₪◕、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒☁☁，然後置於無菌操作檯☁☁，開啟瓶口☁☁，輕輕吹打後☁☁，將其中的細胞懸液轉移到離心管中☁☁，然後1200rpm離心3min☁☁，去上清； 2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中☁☁，並加入5-6mL新鮮培養基☁☁，然後將其置於細胞培養箱中培養☁☁，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液（離心後去舊液☁☁，加入新鮮培養基）； 3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時☁☁，對其進行傳代☁☁，*次傳代比例為1:2（離心後平均分成兩瓶培養）╃•。
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細胞總數·◕₪•： | 1~3*106 |
傳代週期·◕₪•： | 2-3天 |
傳代比例·◕₪•： | 1:2~1:4 |
換液頻率·◕₪•： | 2-3天 |
凍存液·◕₪•： | 90%FBS+10%DMSO |
細胞培養過程中遇到的問題·◕₪•：
1. 為什麼培養的細胞要及時傳代✘│╃₪？
答·◕₪•：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性☁☁，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候☁☁，它就會停止生長☁☁，及時傳代後☁☁，細胞的生長得以繼續╃•。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些✘│╃₪？其解決辦法是什麼✘│╃₪？
答·◕₪•：通常細胞生長得非常快時☁☁，pH值通常下降得很快╃•。此時可以及時傳代☁↟╃₪◕、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決╃•。此外☁☁，培養瓶蓋擰得太緊☁↟╃₪◕、NaHCO3 緩衝系統緩衝能力不夠☁↟╃₪◕、培養液中鹽濃度不正確☁↟╃₪◕、細菌☁↟╃₪◕、酵母或真菌汙染等也能導致pH值通常下降得很快╃•。
(1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度☁☁，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％╃•。
(2)改用不依賴CO2培養液╃•。
(3)鬆開瓶蓋1/4 圈╃•。加HEPES 緩衝液至10 到25mM終濃度╃•。
(4)在CO2 培養環境中改用基於Earle′s 鹽配製的培養液☁☁，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配製的培養液╃•。
(5)如果是汙染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌╃•。
3.培養液pH對細胞生長的影響✘│╃₪？
答·◕₪•：由於大多數細胞適宜pH為7.2-7.4☁☁，偏離此範圍可能對細胞生長將產生有害的影響╃•。但各種細胞對pH的要求也不*相同☁☁，原代培養細胞一般對pH變動耐受差☁☁，無限細胞系耐受力強╃•。但總體來說☁☁，細胞耐酸性比耐鹼性強一些╃•。在配製培養用液時☁☁，需要注意一點·◕₪•：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時☁☁，溶液的pH還會向上浮動0.2左右╃•。
4.購買之細胞冷凍管經解凍後☁☁，為何會發生細胞數目太少之情形✘│╃₪？
答·◕₪•：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少☁☁，大都是因為離心過程操作上的失誤☁☁，造成細胞的物理性損傷☁☁，以及細胞流失╃•。建議細胞解凍後不要立刻離心☁☁，應待細胞生長隔夜後再更換培養基即可╃•。但對於DMSO敏感的細胞☁☁，還是復甦細胞時☁☁，用離心去除DMSO比較好╃•。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因✘│╃₪？
答·◕₪•：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳☁☁，原因比較複雜☁☁，常見原因可歸納為·◕₪•：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍後☁☁，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置於–80 ℃太久等╃•。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復甦☁↟╃₪◕、凍存等工作╃•。
6.支原體汙染會對細胞培養有何影響✘│╃₪？
答·◕₪•：支原體汙染幾乎可影響所有細胞之生長引數☁↟╃₪◕、代謝及研究之任一資料╃•。故進行實驗前☁☁，必須確認細胞為mycoplasma-free☁☁，實驗結果之資料方有意義╃•。
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